熒光定量分析多采用工作曲線法，即以已知量的標準物質(zhì)，按試樣相同方法處理后，配成一系列標準溶液，測定其相對熒光強度和空白溶液的相對熒光強度；扣除空白值后，以熒光強度為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，繪制工作曲線；然后將處理后的試樣配成一定濃度的溶液，在同一條件下測定其相對熒光強度，扣除空白值后，從工作曲線上求出熒光物質(zhì)的含量。

如何選擇熒光分光光度計的濾光片？

　　在進行發(fā)射圖譜掃描分析時，根據(jù)斯托克斯定律，設(shè)置的激發(fā)波長要比發(fā)射波長短，例如，激發(fā)波長λex=260nm，則發(fā)射起始波長應(yīng)該從大于260nm的波長開始，比如270nm，發(fā)射結(jié)束波長為870nm。這樣一來，在激發(fā)光的2倍波長(520nm)、3倍波長(780nm)處都會出現(xiàn)激發(fā)波長的尖銳的倍頻峰，若與熒光光譜峰重疊，將會對測試產(chǎn)生干擾，需選用合適的濾光片將其濾掉。

　　倍頻峰就是激發(fā)光的散射峰，雖然波長掃描到雙倍波長的時候出現(xiàn)，但實際波長卻是激發(fā)波長，可以通過增加高通濾光片來去除倍頻峰。高通濾光片一般放在發(fā)射處，片上都標明其可以濾除的大波長。也就是說，體系中增加高通濾光片后，比其上所標波長低的光，也包括這些光的二倍波長光、三倍波長光，會被濾掉；而比其所標波長高的光則可以順利通過?！?/div>